液相色譜儀操作步驟：　

1)．過(guò)濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。

2)．對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3)．打開(kāi)HPLC工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。

4)．進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。

5)．有一段時(shí)間沒(méi)用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10 ml/min。

6)．調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線(xiàn)，觀(guān)察基線(xiàn)的情況。

7)．設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線(xiàn)歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。

8)．進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線(xiàn)，洗掉剩余物。

9)．關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

10)．填寫(xiě)登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

注意事項(xiàng)：

1)．流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。

2)．柱子是非常脆弱的，第yi次做的方法，先不要讓液體過(guò)柱子。

3)．所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。

4)． 壓力不能太大，hao不要超過(guò)2000psi

1.使用”保護(hù)柱”，能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。簡(jiǎn)單的說(shuō)，”保護(hù)柱”即是很短的色譜柱，填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的”保護(hù)柱”，可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)。而達(dá)到延長(zhǎng)柱子壽命的效果。如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)。會(huì)造成反效果。因?yàn)樵诒Ｗo(hù)柱使用過(guò)程中。如污染達(dá)到一定程度而沒(méi)有及時(shí)更換，累積的雜物很可能會(huì)沖入色譜柱中，反而會(huì)造成色譜柱損壞。因此。使用”保護(hù)柱”時(shí)，重要的是要知道什幺時(shí)候該換保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。

2.選擇高品質(zhì)的柱子，并注意使用方法；可以延長(zhǎng)柱子的使用壽命。一般認(rèn)為同一廠(chǎng)牌、同一型號(hào)的柱子之間的品質(zhì)都相同，對(duì)品質(zhì)管理很?chē)?yán)格的廠(chǎng)家而言，這說(shuō)法是成立的。但如果廠(chǎng)家品質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號(hào)的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時(shí)必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過(guò)后都會(huì)產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開(kāi)發(fā)新分析方法時(shí)，許多專(zhuān)家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會(huì)改變；如此一來(lái)，使用舊柱子開(kāi)發(fā)出來(lái)的新分析方法，很可能在再使用同廠(chǎng)牌的新柱子分析時(shí)。發(fā)生無(wú)法達(dá)到預(yù)定效果的情況。總的說(shuō)。開(kāi)發(fā)新分析方法時(shí)要使用品質(zhì)好的新柱子；并且一支柱子hao使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長(zhǎng)。

3.定期沖洗柱子可以延長(zhǎng)柱子使用壽命。我們知道柱子使用一段時(shí)間后總會(huì)有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)。這些雜質(zhì)不會(huì)隨著流動(dòng)相出來(lái)，自然會(huì)逐漸影響柱子的品質(zhì)。這些雜質(zhì)在后來(lái)的分析譜圖上出現(xiàn)。而造成出現(xiàn)怪峰、基線(xiàn)不平等現(xiàn)象。簡(jiǎn)單的解決方法是用較強(qiáng)的流動(dòng)相沖洗。hao是在每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時(shí)使用緩沖劑時(shí)﹐hao用水來(lái)取代緩沖劑。先使用有機(jī)和水的混合溶液為流動(dòng)相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機(jī)溶劑沖洗。如果不先用有機(jī)和水的混合溶液沖洗，而直接用100%有機(jī)溶劑沖洗的話(huà)，緩沖劑很可能會(huì)沉淀出來(lái)，而損壞柱子的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來(lái)沖洗基本就足夠了。專(zhuān)家建議hao將100%有機(jī)溶劑沖洗的條件加在分析實(shí)驗(yàn)程序完畢地后，如此一來(lái)每天在開(kāi)機(jī)前都會(huì)用100%機(jī)溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再?zèng)_洗。打算使用反沖洗處理前，hao參考柱子的保養(yǎng)說(shuō)明書(shū)。所以要真正保護(hù)柱子，使柱子的壽命延長(zhǎng)，hao是使用”保護(hù)柱”和定期沖洗柱子